Home История вирусов и болезней Большая группа протеолитических ферментов

Большая группа протеолитических ферментов

Существует большая группа так называемых протеолитических ферментов, которые расщепляют белки — трипсин, пепсин и др. Эти ферменты переваривают белки, содержащиеся в межклеточном пространстве, и таким образом разъединяют клетки друг от друга. В результате обработки (трипсинизации) кусочков ткани раствором ферментов получают взвесь изолированных клеток. Обработку производят при 32° в специальных колбах при постоянном автоматическом перемешивании до тех пор, пока кусочки ткани не распадутся на отдельные клетки (рис. 18,2—4).

Читателю, несомненно, интересно будет Знать, какое количество клеток можно получить, например, из 1 г ткани. Оказалось, что из 1 г ткани, в зависимости от того, из какого органа она была взята, можно получить от 50 до 100 млн. клеток, т. е. достаточно большой их «выход». Полученную взвесь клеток подвергают затем центрифугированию, чтобы клетки осели. Жидкость над осадком удаляют (сливают), а осадок клеток разводят питательной средой, подогретой до 37° в отношении 1 : 5. Потом в специальной камере (стеклянной плоской чашечке, разрисованной на одинаковые квадраты — подсчитывают под микроскопом число клеток в 1 мл взвеси. Это необходимо для определения количества клеток, которые будут засевать затем во флаконы (матрасы) для культивирования. В зависимости от поставленных задач исследования, в 1 мл засеваемой во флаконы взвеси должно содержаться от 50 до 400 тысяч клеток. Флаконы с клетками, взвешенными в питательной среде, помещают в термостат при 37°. Клетки довольно быстро прикрепляются к стеклу и размножаются. Через 3— 5 дней на ровной стеклянной поверхности флакона образуется сплошной слой размножившихся клеток, покрывающий все дно флакона. Как же выглядит такая культура клеток? Показаны видимые под микроскопом клетки фибробластов и эпителиальные клетки на третий день роста.

Для того чтобы клетки в таких условиях хорошо росли и размножались, их необходимо усиленно кормить, т. е. давать им полноценную питательную среду. Ассортимент питательных сред, применяемых для этих целей, весьма обширен. Имеются специальные среды для культивирования клеток человека, животных, насекомых и растений. По своему составу среды разделяются на естественные (плазма крови, различные сыворотки, тканевые экстракты и пр.), синтетические, состоящие из смеси различных аминокислот, Сахаров, витаминов, органических кислот и неорганических солей, и смешанные, содержащие биологические, органические и неорганические вещества. Разработана даже особая рецептура по составлению питательных сред для культивирования клеток. Во избежание заражения клеток посторонней микрофлорой вовсе культуры в обязательном порядке прибавляют различные антибиотики.